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免疫組化(IHC)如何選擇DAB顯色時間

更新時間:2025-07-25      點擊次數:225

在顯色步驟中,選擇合適的DAB顯色時間是確保免疫組化(IHC)實驗結果準確性和可靠性的關鍵。DAB顯色時間不是固定的,需要根據實際情況進行調整,并且通常建議在顯微鏡下實時觀察以精確控制顯色時間。

1. 顯微鏡下的實時觀察

為了精確把握DAB顯色的終止時機,可以在顯色過程中定時使用顯微鏡觀察切片的染色效果。當目標蛋白位置出現清晰的棕色沉淀且對比度良好時,即可停止反應。

2. 顯色時間的調整

顯色時間過短:可能導致目標蛋白信號不夠明顯,導致染色不足。

顯色時間過長:可能導致DAB繼續沉淀,導致非特異性背景增加,使整個切片變得較暗。

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3. 推薦的顯色時間范圍

一般情況:對于大多數組織切片,顯色時間控制在1至3分鐘之間是一個較為常見的范圍。

特殊情況:如果抗體濃度較高或組織類型特殊(如軟組織或硬組織),可能需要調整顯色時間。例如,軟組織如肝臟和肌肉,顯色時間較短,而硬組織如骨骼可能需要更長時間。

4. 梯度試驗

如果是第一次嘗試,可以進行梯度試驗,以確定最佳顯色時間。通過在不同時間點觀察顯色效果,可以找到最佳的顯色時間。

5. 注意事項

現配現用:DAB顯色液配置好了之后極容易產生DAB的沉積,從而導致樣本上會出現深棕色的絮狀沉淀,干擾結果的判定。

避免過時使用:DAB顯色液在配制完成后最長宜放置30分鐘以內,過時不能使用。

終止反應:顯色完成后,迅速將切片放入自來水中漂洗,終止反應并固定染色效果。

通過以上方法,可以有效地選擇合適的DAB顯色時間,確保免疫組化實驗結果的準確性和可靠性。


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